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Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(P1041-P1042-P1043-P1044)

促銷: 380.00~19000.00
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P1041(250U) P1042(1000U) P1043(3000U) P1044(18000U)

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶

Cat. #P1041,P1042,P1043,P1044

產品簡介

東盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一種創新型的化學修飾熱啟動酶,該酶在室溫下活性被完全封閉,依賴溫度激活酶活性,可有效減少非特異性擴增,具有非常高的特異性。擴增片段長度可達5 kb(簡單模板)。延伸速率為2min/kb70-75℃,簡單模板可達20s/kb)。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA末端。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用先進的化學修飾技術生產,動物源性DNA污染為零,穩定性更強,具有抗體法熱啟動酶不可比擬的優勢。同時,預變性時間縮短至3分鐘,工作效率比大多數化學修飾法熱啟動酶更高,是一款非常新穎、實用的產品。

產品組成

Component

P1041

250U

P1042

1,000U

P1043

3,000U

P1044

18,000U

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl

50 μl

200 μl

200 μl × 3

100 μl× 36

10× Hotstart BufferMg2+ Plus[1]

1.25 ml

1.25 ml× 2

1.25 ml × 6

1.25 ml × 36

6× Loading Buffer[2]

1 ml

1 ml

1 ml

-

[1] 10× Hotstart Buffer分為Mg2+ PlusMg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如無特別說明提供Mg2+ Plus緩沖液。Mg2+ Free10× Hotstart Buffer提供25 mM MgCl2。

[2] P1044不含6× Loading Buffer,如有需要請單獨購買(Cat. #M9041)。

本產品不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

活性定義

一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

10× Hotstart BufferMg2+ Plus

5 μl

2

dNTPs2.5mM

4 μl

0.4 mM

3

upstream primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4 μM

4

downstream primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4 μM

5

Optimus? Hotstart Taq   DNA聚合酶(5U/μl[2]

0.5 μl-1 μl

2.5U-5U

6

template DNA[3]

1-4 μl

<1μg

7

超純水[4]

To 50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]

Variable

-

[1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

[2] 根據目的片段擴增的難易程度調整DNA聚合酶的用量。

[3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

Template

Dosage

人類基因組DNA

0.1μg-1μg

λDNA

0.5ng-5ng

大腸桿菌基因組DNA

10ng-100ng

質粒DNA

0.1ng-10ng

[4] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[5] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

2. 設定反應程序進行PCR反應

Stage

Temperature

Time

Number of Cycles

Initial Denaturation

94℃

3 min

1

Denaturation

94℃

30 sec

25-35

Annealing

55-68℃[1]

30 sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final Extension

72℃

5-10 min

1

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

[2] 延伸時間按2min/kb來設最佳(簡單模板可達20s/kb)。

3. 分析結果

將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

操作注意事項

1 本產品采用改進的化學修飾技術,依賴溫度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特異性結合,可在室溫下配置反應體系。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3'末端通?;峒由?/span>1個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

相關產品

名稱

貨號

規格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高純度質粒小提試劑盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取試劑盒

R1051

50

基因組DNA快速提取試劑盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝膠回收試劑盒

N1071/N1072/N1073

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20/100

更多PCR酶、DNA Marker及核酸提純類產品請登錄東盛生物官網查詢。

 

 


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